壳聚糖纳米纤维支架对猪肝细胞分泌猪内源性逆转录病毒的影响

编号：NMJS01544

篇名：壳聚糖纳米纤维支架对猪肝细胞分泌猪内源性逆转录病毒的影响

作者：韩冰； 施晓雷； 肖江强； 张悦； 褚薛慧； 顾劲扬； 顾忠泽； 丁义涛；

关键词：壳聚糖纳米纤维支架； 猪肝细胞； 猪内源性逆转录病毒； 生物人工肝；

机构： 南京大学医学院附属鼓楼医院肝胆外科； 南京医科大学鼓楼临床学院肝胆外科； 东南大学生物电子学国家重点实验室；

摘要： 探讨壳聚糖纳米纤维支架对肝细胞的PERV分泌量以及其感染性的影响。将新鲜分离的猪肝细胞接种于壳聚糖纳米纤维支架或普通条件下连续培养7 d,分为实验组(Nano组)和对照组(Hep组)。每天收集培养液检测逆转录酶(RT)活性,并通过RT-PCR和实时定量PCR测定PERV RNA水平。通过western blot检测细胞裂解液中PERV gag 30蛋白含量。细胞培养液体外孵育HEK293细胞以测定其感染性。结果表明:实时定量PCR、RT活性以及western blot具有相似的变化趋势。在体外培养10 h和2 d出现PERV分泌高峰然后逐渐下降。除第6 dPERV RNA水平和第5 d蛋白水平实验组明显高于对照组外,其余均无明显差异。体外感染实验无HEK293细胞感染。壳聚糖纳米纤维支架会延长猪肝细胞的PERV分泌时间但对分泌量以及体外感染性并无明显影响,可安全用于生物人工肝。