构建叶酸修饰的乳腺癌靶向纳米超声造影微粒

编号：YYHY00365

篇名：构建叶酸修饰的乳腺癌靶向纳米超声造影微粒

作者：陈园园[1] ;徐枫[1] ;杨辉[2] ;刘婷[1] ;周建桥[3] ;蔡晨蕾[4] ;叶园园[1] ;刘培峰[4] ;韩宝三[1]

关键词：纳米粒 超声检查 造影剂 组织工程 生物材料 纳米材料 聚乙二醇 聚乳酸-羟基乙酸共聚物 叶酸受体 超声诊断 靶向对比剂 乳腺癌 国家自然科学基金

机构： [1]上海交通大学医学院附属新华医院普外科、普外科实验室,上海市200092; [2]教育部高分子合成与功能构造重点实验室、浙江大学高分子科学与工程学系,浙江省杭州市310027; [3]上海交通大学

摘要： 背景：研究表明,纳米级超声对比剂具有较强的穿透能力,使血管外靶组织显像成为可能,超越了微米级对比剂仅能发生血池内显像的局限性。目的：构建叶酸修饰的乳腺癌靶向纳米超声造影微粒,评估其与细胞靶向结合的能力及体外超声成像效果。方法：采用超声乳化-蒸发法制备对比剂聚乙二醇化乳酸羟基乙酸共聚物包裹液态氟碳的纳米粒（记为m PP/PFOB）和叶酸修饰的聚乙二醇化乳酸羟基乙酸共聚物包裹液态氟碳的纳米粒（记为m PPF/PFOB）。（1）生物相容性检测：取对数生长期的人皮肤成纤维细胞HFF-1、人乳腺癌MCF-7细胞,分别加入0,0.005,0.01,0.02,0.05,0.1,0.2,1 g/L的m PP/PFOB或m PPF/PFOB,培养24 h后检测细胞活力。（2）体外寻靶能力检测：取对数生长期的HFF-1、MCF-7细胞,均分3组干预,A、B组分别加入Cy5标记的m PP/PFOB与m PPF/PFOB,C组在加入Cy5标记的m PP/PFOB前以叶酸处理2 h,培养0.5 h后,流式细胞仪检测荧光强度;培养20 min后,共聚焦显微镜观察对比剂在细胞中的分布。（3）体外超声显影：实验分3组,A组为生理盐水,B组制备m PPF/PFOB纳米粒与生理盐水混悬液,C组以m PPF/PFOB纳米粒与生理盐水混悬液重悬MCF-7细胞沉淀,制备纳米粒与细胞混悬液,将3种液体加入乳胶手套中扎紧,采用超声诊断仪检测体外超声成像效果。结果与结论：（1）生物相容性检测结果：两种纳米粒无明显的细胞毒性;（2）流式细胞仪检测结果：在MCF-7细胞中,B组平均荧光强度明显高于A组和C组;而在HFF-1细胞中,3组平均荧光强度无显著差别;（3）共聚焦显微镜观察结果：m PPF/PFOB主要聚集在MCF-7细胞膜周围,m PP/PFOB则分布在胞浆。（4）体外超声显影结果：m PPF/PFOB与MCF-7细胞结合后,在体外能增强超声回声;（5）结果提示：叶酸修饰的聚乙二醇化乳酸羟基乙酸共聚物包裹液态氟碳的纳米粒具有良好的生物相容