甲胎蛋白纳米金侧流免疫层析快速检测试纸的研制

编号：NMJS02093

篇名：甲胎蛋白纳米金侧流免疫层析快速检测试纸的研制

作者：方立超； 程平； 蒋丽莉； 黄辉； 李艳； 贺娟； 邓均； 郑峻松； 桂忆南； 杨聚；

关键词：甲胎蛋白类； 纳米金； 侧流免疫； 试纸； 技术平台；

机构： 第三军医大学医学检验系暨药学院临床检验学教研室； 第三军医大学学员旅15队；

摘要： 目的建立本教研室纳米金侧流免疫快速检测试纸研发的技术平台。方法通过柠檬酸三钠还原法制备纳米金颗粒。以免疫纳米金(A520-A580)为纵坐标,相应的金标记参数(pH值、抗体量)为横坐标绘制曲线,曲线拐点为选择参数。标记缓冲体系的选择主要依据标记过程中纳米金聚沉与否确定。根据免疫金的释放程度和速度,选择合适的硝酸纤维素膜和作为结合垫和样品垫的玻璃纤维素膜、结合垫及样品垫预处理液配方。依据点加抗体的硝酸纤维素膜和结合垫在不同条件下干燥后组装试纸,免疫金的释放程度和速度确定干燥条件。组装试纸检测临床血清标本,比较与ELISA检测法的阳性符合率。结果成功制备了40 nm的纳米金。甲胎蛋白(AFP)抗体Ⅰ最适标记pH值为8.5,最适抗体标记量为78 mg/mL纳米金,标记缓冲体系为pH值8.5 10mM Tris-HCl溶液。硝酸纤维素膜为whatman Immunopore RP,以玻璃纤维素膜Ahlstrom8964作为结合垫和样品垫。结合垫选择pH值8.5的处理液预处理,样品垫选择pH值9.5的处理液预处理。硝酸纤维素膜封闭洗涤后在26℃湿度26%条件下干燥1 h,结合垫在26℃湿度26%条件下干燥2 h。当AFP含量大于10 ng/mL时,组装试纸检测临床血清标本的阳性检出率与ELISA法符合率为100%。结论成功建立了本组纳米金侧流免疫快速检测试纸研发的技术平台,适用于病原微生物感染及肿瘤特异性标志物的现场快速检测。